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      動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒檢測原理

       動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒檢測原理

       

       本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統,提取組織和細胞的基因組DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特有新型材料,能夠高效、專一吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 提取的基因組DNA的片段大,純度高,質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作,包括酶切、 PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。

       

      1、樣品的處理:
      a、細胞:取 1×106
      -1×107 個懸浮培養細胞,12000rpm 離心 1min 收集細胞,貼壁細胞先用胰蛋白酶消化處
      理,再用預冷的 PBS 吹打成細胞懸液,然后 12000rpm 離心 1min 收集細胞,盡量除去上清,加 200ul 溶液 A,
      振蕩至徹底混勻。
      b、組織:組織量不宜過大,一般不要超過 25mg,可以使用勻漿器勻漿,最好用液氮研磨成粉末狀,再用
      預冷的 PBS 或無菌水充分懸浮,然后 12000rpm 離心 1min 收集細胞,盡量除去上清,加 200ul 溶液 A,振蕩至
      徹底混勻。
      2、向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml),55℃放置 15min。
      3、加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml ),充分顛倒混勻,55℃水浴消化,細胞消化時間較短,組織消化時間較長,
      一般需要 1-3 個小時才能完成(鼠尾需要消化過夜)。消化期間可顛倒離心管混勻數次,直至樣品消化完全為止。
      消化完全的指標是:液體清亮及粘稠。
      4、加入 200ul 體積溶液 B,充分顛倒混勻,如出現白色沉淀,可放置于 75℃ 15-30min,沉淀即會消失,不影
      響后續實驗。如溶液未變清亮,說明樣品消化不徹底,可能導致提取的 DNA 量少及不純,還有可能導致堵塞
      吸附柱。
      5、加入 200ul 無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,不影響 DNA 的提取,可將溶液和絮狀沉淀都
      加入吸附柱中。
      6、12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

       

      注意事項:
      1、試劑盒拆封后,RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。
      2、樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的DNA的片段較小且提取量也下降。
      3、如果試劑盒中的溶液出現沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響效果。
      4、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul,體積過小會影響回收效率:洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率。

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