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      明膠酶譜法檢測試劑盒操作小貼士

      明膠酶譜法檢測試劑盒操作小貼士

       

      1. 簡介:
      基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解細胞外基質的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過影響細胞外基質,膠原酶參與胚胎發育、形態發生、組織重塑等過程,并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程,其在臨床診斷和治療中的意義日益受到重視。

       

      2. 檢測原理:
      本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電泳,電泳結束后取出凝膠與酶反應Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區域,從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學反應緩沖液,可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進行50次標準小膠檢測,如果小膠加樣孔為10~15個,則總計可檢測500~750個樣品。

       

      3. 檢測目的:
      本試劑盒用于檢測MMP-2、MMP-9 酶譜及活性(Detect MMP2 and MMP9 as low as 1nM)。

       

      4.試劑盒組成與儲存:
      A. 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml μl, −20 ºC;
      B. 10 × Substrate G, 50 ml, −20 ºC;
      C. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用時用蒸餾水稀釋;
      D. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 使用時用蒸餾水稀釋;
      E. SDS-PAGE 凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液, 4 ºC。

       

      說明:

      1. 10 mM 能夠EDTA完全抑制MMP活性。
      2. 凝膠干燥:可使用聚丙烯酰胺凝膠干膠裝置室溫快速干燥凝膠,作為*記錄保留。

       

      參考文獻:
      1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494
      2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamidegels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem,1980,102,196–202

       

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