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      技術文章
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      免疫組化切片注意事項

         切片組織得到很好處理后在進行切片之前還應對玻璃片進行處理,由于我們檢測抗原是多種多樣的,因染色操作程序復雜,時間較長,有些抗原是要進行各種抗原修復處理,如微波、高壓、水溶酶等,玻片如果得不到很好的處理,將易造成脫片,為保證免疫組化實驗的正常進行,要求在貼片前對載玻片作適當處理,必須在清洗干凈的玻片上進行粘合劑的處理以防脫片。
      1)Poly-L-Lysine 
      一般采用分子量30000左右的0.5%多聚賴氨酸,也可用試劑公司出售的其濃溶液以1:10去離子水稀釋。方法是將玻片浸泡其中,傾盡余液,在60℃溫箱中烤干備用,此方法的優點是可以用于多種組織化學、免疫組化及分子學檢測中的應用,粘貼效果,但價格稍貴。
      2)明膠硫酸鉻鉀法
      將2.5g明膠加熱溶于500ml蒸餾水中,完全溶解冷卻后加入0.25g硫酸鉻鉀攪勻充分溶解即可使用。方法是將玻片浸泡其中2 min,取出控盡液體入溫箱中烤干備用。此法價格便宜、方法簡單,任何實驗都可以使用,特別適用于大批量的使用,但應注意,如果液體變藍或粘稠狀停用。
      3)APES (3-氨丙基-乙氧基甲硅烷)
      此法必須現用現配。將洗凈玻片入1:50丙酮稀釋的APES中,浸泡20s,取出稍停再入丙酮或蒸餾水中刷去末結合的APES晾干即可。用此方法粘合的玻片應垂直烤片不能平拷,否則組織片中易出現氣泡。
        切片必須保持切片刀銳利,切片要薄而平整、無皺摺、無刀痕,如有上述問題的切片在進行免疫組化染色都將出現假陽性現象,切片厚度一般為3~4μm,切好的切片在60℃溫箱中過一夜,注意烤片的溫度不宜過高,否則易使組織細胞結構破壞,而產生抗原標記定位彌漫現象。

       

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